L’affresco occupa la parete est della Galleria della Cappella e si associa al tema di Ercole che sconfigge Cerbero, rappresentato sulla parete opposta. Entrambe le vicende erano ben conosciute e potevano contare su una salda tradizione visiva di riferimento. Secondo la mitologia greca Prometeo fu punito da Zeus per aver rubato il fuoco agli dei per consegnarlo agli uomini. Nella scena del Supplizio Prometeo è rappresentato legato al suolo con delle catene, mentre un rapace gli strappa il fegato.